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生物概念丨免疫荧光技术的原理及应用

时间: 2021-04-02 15:16 编纂: 手机购彩app平台阅读:

在很多生物细胞的研究中我们常听说一种概念——免疫荧光技术,我们知道荧光技术的应用在生物研究领域中有着恰到好处的应用,因此我们将荧光技术应用到显微镜中,显微镜荧光技术的应用帮手我们实现荧光成像,从而帮手我们在实际研究中提供了必然程度的便当性。那么免疫荧光技术的原理和应用又是怎样的呢?
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首先我们要明白免疫荧光技术,是标识表记标帜免疫技术中成长最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上成立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,操作抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
免疫荧光技术的长处是特异性强、敏感性高、速度快。而缺点也相对明显:非特异性染色问题尚未完全解决,成果判定的客不雅观性不足,技术程序也还比力复杂。
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免疫荧光技术的基本原理是:免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标识表记标帜在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。
直接法:将标识表记标帜的特异性荧光抗体,直接加在抗原标本上,经必然的温度和时间的染色,用水洗去未参加反应的多余荧光抗体,室温下干燥后封片、镜检。
间接法:如查抄未知抗原,先用已知未标识表记标帜的特异抗体(第一抗体)与抗原标本进行反应,用水洗去未反应的抗体,再用标识表记标帜的抗抗体(第二抗体)与抗原标本反应,使之形成抗原—抗体—抗体复合物,再用水洗去未反应的标识表记标帜抗体,干燥、封片后镜检。假如查抄未知抗体,则注解抗原标本是已知的,待检血清为第一抗体,其它程序的抗原查抄不异。
标识表记标帜的抗抗体是抗球蛋白抗体,同于血清球蛋白有种的特异性,如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应,因此,制备标识表记标帜抗体适用于鸡任何抗原的诊断。
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用荧光抗体示踪或查抄相应抗原的方法称荧光抗体法;用已知的荧光抗原标识表记标帜物示踪或查抄相应抗体的方法称荧光抗原法。这两种方法总称免疫荧光技术,因为荧光色素不单能与抗体球蛋白结合,用于检测或定位各种抗原,也可以与其他蛋白质结合,用于检测或定位抗体,但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用,所以人们习惯称为荧光抗体技术,或称为免疫荧光技术。以荧光抗体方法较常用。用免疫荧光技术显示和查抄细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞(或组织)化学技术。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同,还可进一步分做若干种。与放射免疫法比拟,荧光免疫法无放射性污染,并且大多操作简便,便于推广。国外出产的TDM用试剂盒,有相当一部门即属于此类,并且还有专供TDM荧光偏振免疫阐发用的主动阐发仪出产。
由于一般荧光测定中的本底较高等问题,荧光免疫技术用于定量测定有必然困难。近年来成长了几种不凡的荧光免疫测定,与酶免疫测定和放射免疫阐发一样,在临床查验中应用。
更多关于荧光的应用可咨询我们专业的工程技术人员。
 
本文仅供参考
 

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